SIGMA胎牛血清|F8687-500ml

名稱：胎牛血清

貨號：F8687-500ML

品牌：SIGMA

干細胞是在所有多細胞生物中發(fā)現(xiàn)的原始細胞。

它們保留了通過有絲分裂細胞分裂來更新自身的能力，并且可以分化成多種專門細胞類型。

哺乳動物干細胞的三大類是：源自胚泡的胚胎干細胞，在成人組織中發(fā)現(xiàn)的成年干細胞和在臍帶中發(fā)現(xiàn)的臍帶血干細胞。

在發(fā)育中的胚胎中，干細胞可以分化為所有專門的胚胎組織。

在成年生物中，干細胞和祖細胞可作為人體的修復(fù)系統(tǒng)，補充專門的細胞。

由于干細胞可以通過細胞培養(yǎng)而生長并轉(zhuǎn)化為具有與諸如肌肉或神經(jīng)等各種組織的細胞一致的特性的特化細胞，因此提出了將其用于醫(yī)學治療中。

特別是，胚胎細胞系，通過治療性克隆產(chǎn)生的自體胚胎干細胞以及來自臍帶血或骨髓的高可塑性成年干細胞被吹捧為有前途的候選者。

醫(yī)學研究人員認為，干細胞療法有可能從根本上改變?nèi)祟惣膊〉闹委煼椒ā?/span>

已經(jīng)存在許多成人干細胞療法，尤其是用于治療白血病的骨髓移植。

在干細胞研究中，有時需要體外培養(yǎng)和分析細胞。細胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian品牌特級進口胎牛血清，它的內(nèi)毒素小于3Eu/ml，使細胞更健康，客戶做實驗更加順利。

Gibco 胎牛血清產(chǎn)品

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BSE 風險最小且病毒風險較低的血清

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三次 0.1 微米過濾

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12、使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?

EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。

13、可否使用與原先不同的培養(yǎng)基?

不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應(yīng)，易造成細胞狀態(tài)不好，最終造成細胞無法存活。

14、可否使用與原先不同的血清種類?

不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

15、細胞為何生長不均勻?

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導(dǎo)致16、購買的細胞死亡或細胞存活率不佳

研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久。

17、細胞抱團怎么處理?

一些懸浮細胞抱團生長是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團)。

18、細胞內(nèi)有空泡，是否是正常現(xiàn)象?

部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細胞代次較高，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。

19、細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度，對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞，傳代太稀;或者生長較快的細胞，傳代較密，細胞嚴重堆疊生長)。

20、細胞生長逐漸變慢是什么原因?

細胞增殖變慢有以下原因：1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細胞營養(yǎng)不良 4.細胞頻繁傳代 5.細胞狀態(tài)不佳或老化 6.細胞存在污染。

21、培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時，則應(yīng)使用5% CO2培養(yǎng)細胞。

22、CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水，水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子，水盤中可添加1%硫酸銅以預(yù)防霉菌污染。

23、細胞接種密度多少合適?

依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經(jīng)驗：一般倍增時間24 h內(nèi)的細胞，傳代比率1:6-1:12為宜，倍增時間24-48 h的細胞，傳代比率1:3-1:8為宜，倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。

SIGMA胎牛血清|F8687-500ml

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人結(jié)直腸腺癌細胞 SW620

人結(jié)直腸腺癌細胞+GFP SW620+GFP

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人膀胱移行細胞癌 SW780

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人乳頭狀甲狀腺癌細胞株 TPC-1

24、培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點，是污染嗎?

首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規(guī)則，是否運動，是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規(guī)則，做布朗運動，黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點大小一致，快速移動，很可能是細菌污染。

25、如何預(yù)防細胞培養(yǎng)中黑點的產(chǎn)生?

掌握細胞傳代的最佳時機，不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產(chǎn)生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴格控制水質(zhì)和器皿的清潔。26、黑點已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進行處理?

如果判定黑點是污染，請及時將細胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進行：

如果是懸浮細胞：收集細胞上清慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細胞：將細胞用PBS洗2-3遍，洗的時候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細胞，將收集的細胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min，5-6 min)并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養(yǎng)。

27、培養(yǎng)用dish,flask是否相同？

不同廠牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，雖對大部分細胞沒有太大之影響，惟少數(shù)細胞則可能因使用廠牌不同之dish或flask而有顯著之生長差異。