NCI-H441 人肺腺癌細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)

貨號(hào)：WS0395H

細(xì)胞介紹

NCI-H441建系于1982年（A.F.Gazdar，etal.)。該細(xì)胞分離自一名肺腺癌患者的心包液。該細(xì)胞能在半固體瓊脂糖中形成克隆，并能表達(dá)肺泡表面活性蛋白A。該細(xì)胞在有血清培養(yǎng)基中倍增時(shí)間為58小時(shí)，在無(wú)血清培養(yǎng)基中倍增時(shí)間為99-138小時(shí)。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：肺癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù) 

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

三、 細(xì)胞傳代操作步驟

A. 貼壁細(xì)胞傳代

1. 準(zhǔn)備：吸棄舊培養(yǎng)基。

2. 沖洗：沿培養(yǎng)瓶側(cè)壁緩慢加入PBS等沖洗液，輕輕晃動(dòng)后吸棄，去除殘留血清。

3. 消化：加入預(yù)熱的胰酶（如T25加1ml），輕輕晃動(dòng)使胰酶覆蓋所有細(xì)胞。

4. 孵育：室溫消化約2分鐘（時(shí)間因細(xì)胞而異）。

5. 觀察：在顯微鏡下觀察，直至≥90% 細(xì)胞變圓、脫落。若未達(dá)到，可每30秒檢查一次。

6. 終止：當(dāng)細(xì)胞充分解離后，立即加入兩倍胰酶體積的預(yù)熱的培養(yǎng)基終止消化。

7. 吹打：用移液器輕輕吹打瓶壁，使細(xì)胞脫落并分散成單細(xì)胞懸液。

8. 離心：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，200 × g 離心 3-5分鐘，棄上清。

9. 重懸與接種：用少量新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，按適當(dāng)比例稀釋后，接種到新的培養(yǎng)瓶中。

10. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱。若使用普通瓶蓋，務(wù)必旋松瓶蓋以利氣體交換。

B. 懸浮細(xì)胞傳代

1. 收集與離心：將細(xì)胞懸液全部轉(zhuǎn)移至離心管，1000 rpm 離心 5分鐘，棄上清。

2. 重懸：加入1-2ml新鮮培養(yǎng)基，輕柔重懸細(xì)胞。

3. 接種：按1:2的比例將細(xì)胞懸液傳至新T25培養(yǎng)瓶，并補(bǔ)充總培養(yǎng)基量至5-8ml。

4. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

四、 特殊問(wèn)題處理：運(yùn)輸中脫落的貼壁細(xì)胞

部分貼壁不牢的細(xì)胞在運(yùn)輸中會(huì)脫落，屬正?，F(xiàn)象，按以下步驟處理：

1. 收集：將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

2. 清洗：用PBS重懸細(xì)胞，再次離心（1200rpm, 3-5min）棄去PBS。

3. 消化：加入約1ml 0.25%胰酶，輕柔混勻（勿劇烈吹打），放入培養(yǎng)箱消化1-2分鐘。

4. 終止與分散：取出后輕輕吹打使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

5. 重懸與接種：加入5ml培養(yǎng)基重懸，按比例接種到新培養(yǎng)瓶/皿中。

6. 觀察：鏡下觀察。若細(xì)胞為單顆或僅有3-5個(gè)細(xì)胞的小團(tuán)，可正常培養(yǎng)，待其貼壁生長(zhǎng)。

大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 A7R5

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化) PC-12(低分化)

大鼠β胰島素瘤細(xì)胞 RIN-M5F

大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元瘤細(xì)胞 VSC4.1

大鼠骨肉瘤細(xì)胞 UMR-106

大鼠腦I型星形膠質(zhì)細(xì)胞 CTX-TNA2

大鼠垂體瘤細(xì)胞 MMQ

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化) PC-12(未分化)

大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞 RBL-2H3

大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞系 OLN-93

大鼠垂體瘤細(xì)胞 GH3

大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞 L6

正常大鼠腎細(xì)胞 NRK-49F

大鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞 RS1

大鼠肺泡Ⅱ型細(xì)胞 RLE-6TN

大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細(xì)胞 AR42J

大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞 IEC-6

大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 C6

大鼠胚胎心肌細(xì)胞 H9c2(2-1)

大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 DRG

大鼠肝癌細(xì)胞 H4-II-E-C3

大鼠正常肝細(xì)胞 BRL3A

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化) PC-12(高分化)

大鼠空腸膠質(zhì)細(xì)胞 EGCCRL-2690

大鼠雪旺細(xì)胞 RSC96

大鼠腎小球系膜細(xì)胞 HBZY-1

大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞 9L/lacZ

大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞 INS-1

大鼠肝上皮樣干細(xì)胞 WB-F344

正常大鼠腎細(xì)胞 NRK-52E

大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 HAPI

小鼠乳腺癌細(xì)胞 AT-3

小鼠肺上皮細(xì)胞 TC-1

小鼠鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞 SCC7

小鼠垂體瘤細(xì)胞 AtT-20

小鼠淋巴結(jié)上皮細(xì)胞 SVEC4-10

小鼠胚胎纖維細(xì)胞 STO

小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞 TM3

小鼠急性骨髓性白血病 C1498

小鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞 MOVAS

小鼠黑色素瘤細(xì)胞 B16

小鼠乳腺癌細(xì)胞 E0771

小鼠樹(shù)突狀瘤細(xì)胞 DC2.4

小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 RAW264.7

小鼠成纖維細(xì)胞 NCTCclone929

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株 bend.3

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 C3H/10T1/2

小鼠心肌細(xì)胞　 HL-1

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 Neuro-2a

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF

小鼠腎小管上皮細(xì)胞 TCMK-1

小鼠單核巨噬細(xì)胞 J774A.1

小鼠胚胎肌母 C2C12

小鼠前脂肪胚胎成纖維細(xì)胞 3T3-L1

小鼠肺泡上皮細(xì)胞 MLE-12

小鼠乳腺上皮細(xì)胞 HC11

小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞株 RGC-5

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株 MC-38

小鼠淋巴瘤細(xì)胞(NK靶細(xì)胞) YAC-1

小鼠T淋巴瘤細(xì)胞（雞OVA基因修飾） E.G7-OVA

小鼠正常肝細(xì)胞 NCTC1469

小鼠肺泡巨噬細(xì)胞 MH-S

小鼠肺腺癌細(xì)胞 LA7120

小鼠腎小球足細(xì)胞 mpc-5

小鼠T淋巴細(xì)胞 CTLL-2

小鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 MAEC

正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞 TM4

小鼠淋巴細(xì)胞白血病 L1210

小鼠腹水瘤細(xì)胞 S-180

小鼠雜交瘤（抗CD2）細(xì)胞 OKT11

小鼠小腦細(xì)胞 C8-D1A

小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 MLTC-1

小鼠下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞 GT1-7

小鼠黑色素瘤細(xì)胞 B16-F10

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 CT26.WT

小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 L Wnt-3A

小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞 EOMA

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞 NE-4C

小鼠胰島β細(xì)胞株 Min6

小鼠B細(xì)胞淋巴瘤 A20

小鼠肝癌細(xì)胞 Hepa1-6

小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 Bv-2

小鼠乳腺癌細(xì)胞 4T1

小鼠胚胎瘤細(xì)胞 ATDC5

小鼠胰腺癌細(xì)胞 PANC02

小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞 GL261

小鼠肺癌細(xì)胞 LLC

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞 K7M2wt

小鼠乳腺癌細(xì)胞 EMT6

小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞 HT22

小鼠小腸內(nèi)分泌細(xì)胞系 STC-1

小鼠乳腺上皮細(xì)胞 EpH4-Ev

小鼠肝細(xì)胞 AML12

小鼠膀胱癌細(xì)胞 MB49

小鼠巨噬細(xì)胞 Ana-1

小鼠腎小球系膜細(xì)胞 SV40-MES-13

小鼠胚胎肝細(xì)胞 BNLCL.2

小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞 P815

小鼠腎癌細(xì)胞 Renca

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤瘤株 G422

小鼠骨髓瘤細(xì)胞 SP2/0

小鼠精原細(xì)胞系 GC-1spg

小鼠腎髓質(zhì)細(xì)胞 mIMCD-3

小鼠前列腺癌細(xì)胞 RM-1

小鼠宮頸癌細(xì)胞 U14

小鼠卵巢癌細(xì)胞 ID8

小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 L-WRN

小鼠胰腺腺泡癌細(xì)胞 266-6

小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞　 OP9

小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞 MC3T3-E1

人子宮頸表皮癌細(xì)胞MS751 MS751

小鼠肝癌 H22

小鼠淋巴瘤細(xì)胞 EL4

小鼠骨樣細(xì)胞 MLO-Y4

小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞 MS1

豬腎傳代細(xì)胞 IBRS-2

恒河猴胚腎細(xì)胞 FRHK-4