COLO320 HSR細胞

生長狀態(tài)：貼壁生長

蘇州千舍生物，細胞培養(yǎng)試劑，常備國內(nèi)外常見品牌血清/胎牛血清，擁有完善的細胞庫管理體系，供應上萬種類細胞株細胞系，公司細胞技術(shù)60%為碩士和博士學歷，其中明星產(chǎn)品有：DC2.4細胞、RAW264.7細胞、COV434細胞、HO-8910細胞、A2780細胞、SK-OV-3細胞、OVCAR-3細胞、OVCA433細胞、HEK-293-6e細胞、FRO細胞、HEPG2.2.15細胞、HL-7702細胞、L-02細胞、M-ICC12細胞、143B細胞、HOS細胞、M4e細胞、M2e細胞、TU686細胞、TU212細胞、vero細胞、SW48細胞、SW480細胞、NCCIT細胞、B16-F10細胞、HK-1細胞、Hep2細胞、C666-1細胞、HNE1細胞、HNE1/DDP細胞、capan-1細胞、vero e6細胞、A375細胞、Hs294T細胞、HSC-LX-2細胞、LOVO細胞、MKN-28細胞、RL952細胞、Hela細胞、A549細胞、Ishikawa細胞、EBC-1細胞、H1993細胞、H1993細胞、Hep-2細胞、NCI-H441細胞、LS174T細胞、NCCIT細胞、capan-1細胞、Hep3B細胞、HUVEC細胞、SW116細胞等。

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COLO320 HSR細胞幾種常用細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品

⒈ BME(basal medium eagle)基礎(chǔ)培養(yǎng)基

⒉ MEM

⒊ DMEM

⒋ IMDM

⒌ RPMI-1640

⒍ M199

⒎ Mccoy's 5A

⒏ F10 F12 DMEM混合F12(三)幾種常用細胞培養(yǎng)配套試劑的配置(緩沖液、平衡鹽溶液等)

五、細胞傳代培養(yǎng)（消化法）

具體操作：

（一）傳代前準備

1.預熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱。

2.用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染。

4.點燃酒精燈：注意火焰不能太小。

5.準備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。？？？

6.取出預熱好的培養(yǎng)用液：取出已經(jīng)預熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。

7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細胞：注意取出細胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭

顯微鏡

的臺面，再在鏡下觀察細胞。

8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

（二）胰蛋白酶消化

1.加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細胞最好，最佳消化溫度是37℃。

2.顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液。

（三）吹打分散細胞

1.吹打制懸：用滴管將已經(jīng)消化細胞吹打成細胞懸液。

2.吸細胞懸液入離心管：將細胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液。

（四）分裝稀釋細胞

1.分裝：將細胞懸液吸出分裝至2-3個培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察細胞量，必要是計數(shù)。注意密度過小會影響傳代細胞的生長，傳代細胞的密度應該不低于5×105/ml。最后要做好標記。

（五）繼續(xù)培養(yǎng)

用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細胞2小時后開始貼附在瓶壁上。當生長細胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25％時為一個＋，占50％為＋＋，占75％時為＋＋＋。

傳代細胞培養(yǎng)注意事項：

1.嚴格的無菌操作

2.適度消化：消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應該注意培養(yǎng)細胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。

附：EDTA（0.02％乙二胺四乙酸二鈉）消化液配方：EDTA 0.20g，NaCl 8.00g， KCl 0.20g， KH2PO4 0.02g， 葡萄糖 2.00g，0.5％酚紅4ml，加入蒸餾水定容至1000ml。10磅20min高壓滅菌，使用時調(diào)節(jié)PH值到7.4。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養(yǎng)瓶要*清洗，否則再培養(yǎng)時細胞容易脫壁。

六、細胞的復蘇

細胞復蘇的原則--快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。

人乳腺癌細胞+LUC細胞，MCF-7+Luc人結(jié)直腸腺癌細胞 COLO320

人結(jié)直腸腺癌細胞 COLO320 DM

人結(jié)直腸腺癌細胞 COLO320 HSR

人結(jié)腸癌細胞 CW-2

結(jié)腸癌細胞 cx-1

人巨核細胞白血病細胞 DAMI

人Burkitt's淋巴瘤細胞 DAUDI

人結(jié)直腸腺癌細胞 DLD-1

人前列腺癌細胞 DU145

人臍靜脈細胞融合細胞 EA.hy926

人食管癌細胞 Eca-109

人膀胱癌細胞 ECV-304

人膀胱癌細胞 EJ-1[EJ1]

人卵巢透明細胞癌細胞 ES-2

人腺癌細胞系 F56

人咽鱗癌細胞 FADu

人肝癌細胞亞型（過表達谷氨酰氨合成酶） GS-HEPG2

人T淋巴瘤白血病細胞 H9/HTLV-IIIB

人胚胎干細胞H9 h9 Feeder Frec

人永生化表皮細胞 hacat

人整合SV40基因的乳腺上皮細胞 HBL-100

人非小細胞肺癌細胞 HCC827

人子宮鱗癌細胞(高分化) HCC-94

人膽管細胞型肝癌細胞 hccc-9810

人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞 HCC-LM3

永生化人腦微血管內(nèi)皮細胞 HCMEC/D3

人結(jié)腸癌細胞 HCT116

人結(jié)腸癌細胞 hct-15

人結(jié)直腸癌氟尿嘧啶耐藥株 HCT15/Fu

人結(jié)直腸癌紫杉醇耐藥株 HCT-15/Taxol

人結(jié)直腸癌癌細胞 HCT-8

人子宮內(nèi)膜腺癌細胞 HEC-1-A

人子宮膜腺癌細胞 HEC-1-B

人胚腎細胞 HEK-293（293）

人胚腎細胞 HEK-293A

人紅白細胞白血病細胞 HEL

人子g頸癌細胞 HELA

人g頸癌細胞 chang liver

人g頸癌細胞 HeLa.S3

人肝癌細胞 hepg2.2.15

人肝癌細胞 Hep3B2.1-7 [Hep3B]

人肝癌細胞 HEPG2

人肝癌細胞人肝癌(HBV) HEPG2.2.15