MCF-7/adr 人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株培養(yǎng)說明  

MCF-7/Adr為由MCF-7細胞構建的耐Adr藥物細胞株。

細胞特性

1）來源：人乳腺癌細胞耐藥篩選

2）形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3）含量：>1×10^6  細胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mLwan全培養(yǎng)基重懸細胞后，均勻鋪于含6~8mLwan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

注意：①細胞復蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞生長至匯合度達80%左右時，方可添加400ng/mL ADR藥物；若細胞生長狀態(tài)較為緩慢，可適當降低ADR的濃度（shou次降低一半藥物濃度），或使用不含藥物的wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的ADR濃度。

②建議復蘇細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。

2）細胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）

①待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)。

②棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸凈殘余的PBS。

③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養(yǎng)瓶至細胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。

④將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。

⑤向細胞沉淀中加入1~2mLwan全培養(yǎng)基重懸細胞，輕吹混勻。將細胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中，添加6~8mLwan全培養(yǎng)基。

注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首ci降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞匯合度約80%，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的ADR藥物濃度。

3）細胞凍存

①細胞凍存時，步驟同2）細胞傳代的①~④，細胞計數(shù)后，加入配制好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×10^6 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

注意：細胞凍存過程中，不可添加藥物。

②將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

細胞培養(yǎng)生長緩慢的原因及解決方法？

1、由于更換不同培養(yǎng)液或血清； 2、培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞； 3、培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染； 4、試劑保存不當； 5、接種細胞起始濃度太低； 6、細胞已老化； 7、支原體污染 。 解決方法： 1、比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗，讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液； 2、換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子； 3、用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物； 4、血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清wan全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內用完； 1、增加接種細胞起始濃度； 2、換用新的保種細胞； 3、分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

懸浮細胞成簇或者成團的原因及解決方法?

可能原因： 1、培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ； 2、支原體污染； 3、蛋白酶過度消化使得細胞裂解； 4、DNA污染 。 解決方法： 1、用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸細胞獲得單細胞懸液； 2、分離培養(yǎng)物，檢測支原體； 3、用DNaseI處理細胞。

人白血病阿霉素耐藥株 K562/ADR

人卵巢癌腺癌阿霉素耐藥株 OVCAR-8/ADR

人結直腸癌氟尿嘧啶耐藥株 HCT-15+5FU

人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞 U251MG/TMZ

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株 MCF-7+adr

人舌鱗癌順鉑耐藥株 CAL 27+DDP

人口腔鱗癌順鉑耐藥株 SCC25+DDP

人胃癌順鉑耐藥株 AGS/DDP

人轉移胰腺腺癌細胞吉西他濱耐藥株 ASPC-1/GEM

人卵巢癌順鉑耐藥株 SKOV3/DDP

人肺腺癌耐順鉑株 A549/DDP

人大細胞肺癌順鉑耐藥株 NCI-H460/cis

人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株 LOVO+5FU

胃癌順鉑耐藥株 SGC7901/DDP

吉非替尼耐藥PC-9GR PC-9GR

肺癌紫杉醇耐藥株A549+Taxol　 A549+Taxol　

人肺癌阿霉素耐藥株 A549/Adr

人肝癌阿霉素耐藥株 BEL7402/Adr

人膀胱癌阿霉素耐藥株 BIU-87/Adr

人結腸癌阿霉素耐藥株 HCT8/Adr

人胃癌阿霉素耐藥株 SGC7901/Adr

人結腸癌阿霉素耐藥株 hct116/Adr

人肝癌阿霉素耐藥株 SMMC-7721/Adr

人宮頸癌阿霉素耐藥株 Hela/adr

人胃癌阿霉素耐藥株 BGC823/adr

人卵巢癌阿霉素耐藥株 HO-8910/Adr

人乳腺癌順鉑耐藥株 MDA-MB-231/adr

人結腸癌紫杉醇耐藥株  HCT8/Taxol

人白血病紫杉醇耐藥株  K562/Taxol

人肝癌紫杉醇耐藥株  BEL7402/Taxol

人胃癌紫杉醇耐藥株  BGC823/Taxol

人宮頸癌紫杉醇耐藥株 Hela/Taxol

人結直腸腺癌紫杉醇耐藥株 HCT15/Taxol

人乳腺癌紫杉醇耐藥株 MDA-MB-231/Taxol

人結腸癌耐奧沙利鉑細胞株 HCT8/L

人結腸癌耐奧沙利鉑細胞株 hct116/L

人肝癌耐奧沙利鉑細胞株 SMMC-7721/L

人胃癌奧沙利鉑耐藥株 HGC27/L

人肝癌氟尿嘧啶耐藥株 BEL7402/FU

人結腸癌氟尿嘧啶耐藥株 HCT8/FU

人胃癌氟尿嘧啶耐藥株 SGC7901/FU

人結腸癌氟尿嘧啶耐藥株 SW620/5-Fu

人胃癌氟尿嘧啶耐藥株 BGC823/FU

人宮頸癌氟尿嘧啶耐藥株 Hela/FU

人肝癌順鉑耐藥株 BEL7402/DDP

人膀胱癌順鉑耐藥株 BIU-87/DDP

人結腸癌順鉑耐藥株 HCT8/DDP

人乳腺癌順鉑耐藥株 MCF7/DDP

人胃癌順鉑耐藥株 SGC7901/DDP

小鼠白血病順鉑耐藥株 L1210/DDP

人白血病順鉑耐藥株 K562/DDP

人肝癌順鉑耐藥株 Huh-7/DDP

人肝癌順鉑耐藥株 SMMC-7721/DDP

人卵巢癌順鉑耐藥株 HO-8910/DDP

人結直腸腺癌細胞順鉑耐藥株 HCT15/DDP

人卵巢癌順鉑耐藥株 A2780/DDP

人胃腺癌耐藥株 AGS/DDP

人卵巢癌耐藥株 SK-OV-3/DDP

人乳腺癌順鉑耐藥株 MDA-MB-231/DDP

人結腸癌長春新堿耐藥株 HCT8V

人肺癌吉非替尼耐藥株 A549/吉非替尼耐藥株

人肝癌索拉非尼耐藥株 HUH-7/Sorafenib

人神經(jīng)膠質母細胞瘤耐藥株 U343/TMZ

人肺癌吉西他濱耐藥株 A549/吉西他濱