何為細(xì)胞老化？

1882年，德國生物學(xué)家Weismann曾大膽預(yù)測“在細(xì)胞水平存在老化現(xiàn)象"。他推測：機(jī)體的壽命限制受控于體細(xì)胞的分裂能力；在遺傳進(jìn)化中，不同物種的體細(xì)胞獲得了不同分裂的潛能，從而決定了不同物種的壽命長短。

20世紀(jì)50年代，Swin和他的同事利用原代細(xì)胞體外培養(yǎng)試驗(yàn)證明了來源于不同物種的纖維細(xì)胞均不具備無限分裂的潛能。取得突破性進(jìn)展的還是Hayflflick和Moorhead，他們做了更系統(tǒng)更細(xì)致的觀察和描述，他們對(duì)25株人成纖維細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，在這個(gè)過程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過約50次傳代之后，所有細(xì)胞出現(xiàn)功能退化，并且喪失分裂能力的現(xiàn)象。此后人們將這一現(xiàn)象稱之為“Hayflflick極限"或者自發(fā)性老化。之后也有事實(shí)證明，細(xì)胞老化并不是體外培養(yǎng)所導(dǎo)致，細(xì)胞在體內(nèi)也會(huì)隨著年齡的增長，逐步走向老化。

※細(xì)胞老化最開始的現(xiàn)象通常為細(xì)胞內(nèi)部會(huì)出現(xiàn)空泡（可能是凋亡小體），也可能會(huì)出現(xiàn)黑點(diǎn)，大多沿細(xì)胞周邊排布，內(nèi)部中間也可能會(huì)顯現(xiàn)一些，但相對(duì)周邊較少；

※老化的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)濃縮，胞膜起泡，皺縮等現(xiàn)象；

※老化以后的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)立體感慢慢消失，開始成扁平狀，細(xì)胞與細(xì)胞之間的間隔減小或混在一起，細(xì)胞不再是梭形，而會(huì)成為各種不規(guī)則形狀；

※細(xì)胞折光性變差，鏡下可見細(xì)胞“變薄"，做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，細(xì)胞死亡率會(huì)較高，但培養(yǎng)液不會(huì)發(fā)生迅速變黃的現(xiàn)象，仍清亮。（如果是細(xì)菌污染的話，一般會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液的迅速變黃，混濁，鏡下可見大量繁殖的細(xì)菌；若是支原體污染的話，細(xì)胞也會(huì)失去正常形態(tài)，會(huì)有細(xì)胞的死亡）；

※細(xì)胞的貼壁性減弱，開始有細(xì)胞漂浮在培養(yǎng)液中；

※老化的細(xì)胞表面分泌物會(huì)增多，細(xì)胞表面的純凈度越來越低；

※分裂的細(xì)胞數(shù)量明顯的減少，同時(shí)細(xì)胞的增殖速度也會(huì)大大下降；

細(xì)胞開始長角分化。

細(xì)胞培養(yǎng)中如何預(yù)防老化？

防止細(xì)胞老化最主要還是要做到勤觀察、勤換液、勤傳代、勤保種，特別是傳代，不能等細(xì)胞太密了之后傳，一般細(xì)胞建議長到70％融合度傳代最好；

換培養(yǎng)液應(yīng)該根據(jù)自己細(xì)胞消耗培養(yǎng)基的情況來確定是否該換。如果感覺時(shí)間不好把握的話就多培養(yǎng)幾瓶細(xì)胞，在不同的時(shí)間換液，最后再來比較下，看什么時(shí)候換液好，得出自己的結(jié)論；

選擇正確的血清與培養(yǎng)基：細(xì)胞對(duì)血清特別敏感，直接影響細(xì)胞的生長。一定要選擇適合的血清不然就會(huì)因營養(yǎng)物質(zhì)不協(xié)調(diào)而導(dǎo)致細(xì)胞老化；

在間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)必然要進(jìn)行消化，但是消化對(duì)細(xì)胞的表面蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的破壞作用，因此不能長時(shí)間進(jìn)行消化并且在選擇消化酶時(shí)也要選擇較為合適的pH和濃度，不然就會(huì)使細(xì)胞老化或者分化；

在開始養(yǎng)細(xì)胞并傳代時(shí)，也要特別注意凍存細(xì)胞，以保持細(xì)胞有種子庫存在，可以有效避免細(xì)胞損傷。

雖然，老化細(xì)胞不會(huì)立即死亡，但其基因表達(dá)會(huì)發(fā)生變化，如果細(xì)胞老化現(xiàn)象嚴(yán)重，建議從種子庫或工作庫重新復(fù)蘇細(xì)胞。