— 胎牛血清有必要熱滅活嗎 —

01

目的

血清的滅活就是將血清置于56℃作用30min，然后將它們分裝儲(chǔ)存于-20℃。熱滅活的目的是為了去除血清中的補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)，以排除對(duì)免疫分析的影響。胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒(méi)有必要。研究人員曾對(duì)商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測(cè)定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過(guò)補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn)，我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。此外，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過(guò)程，也對(duì)熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。因此，胎牛血清在大部分的細(xì)胞培養(yǎng)中是不需要滅活的，但在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

02

負(fù)面影響

雖然熱滅活可以去除血清中的一些物質(zhì)，減少免疫球蛋白的細(xì)胞毒性而不破壞多肽生長(zhǎng)因子，但同時(shí)也會(huì)對(duì)一些血清中較不穩(wěn)定的成分進(jìn)行破壞，如生長(zhǎng)因子和氨基酸。熱滅活通常會(huì)降低血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，并且對(duì)血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生（這些沉淀主要是析出的纖維蛋白以及脂蛋白），而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染。注意到這個(gè)現(xiàn)象后，為了驗(yàn)證污染的存在或促進(jìn)沉淀的溶解，許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育，這將會(huì)導(dǎo)致情況變得更糟，因?yàn)檠逯械牡鞍踪|(zhì)會(huì)進(jìn)一步的析出，再次破壞血清的營(yíng)養(yǎng)成分。而為了確定血清未被污染所進(jìn)行的鏡檢，無(wú)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)以及革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)更是浪費(fèi)了實(shí)驗(yàn)者大量的時(shí)間以及精力，給用戶以及供應(yīng)商帶來(lái)不必要的麻煩。

— 結(jié)論 —

綜上所述，除了在免疫學(xué)研究中為排除補(bǔ)體的干擾需要對(duì)血清進(jìn)行滅活外，多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)血清的熱滅活并不是必要的。我們建議，對(duì)于那些對(duì)血清進(jìn)行滅活的用戶，需要通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)來(lái)證實(shí)其必要性，并確定滅活的適當(dāng)條件；此外，在滅活過(guò)程中，需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測(cè)，并選擇一個(gè)可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。