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如何選擇ELISA試劑盒

更新時(shí)間:2022-03-09點(diǎn)擊次數(shù):1547

ELISA試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫試劑盒,用于對(duì)液體樣本中的目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。隨著國家對(duì)科研項(xiàng)目的重視,在科研單位和廣大科研類院校也越來越受歡迎。


ELISA試劑盒之所以受歡迎和它自身的優(yōu)點(diǎn)是分不開的。


首先適合檢測(cè)的樣本很廣泛包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本,具體根據(jù)試劑盒說明書決定,通常檢測(cè)靈敏度比較高。


其次ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體以后,既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性,也不改變酶本身的活性。


最后因?yàn)镋LISA試劑盒操作不依賴昂貴的儀器,且具備準(zhǔn)確性高、反應(yīng)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn),所以適合大批量的檢測(cè),就連食品檢測(cè)行業(yè)ELISA試劑盒也備受青睞。


目前市場(chǎng)上的ELISA試劑盒質(zhì)量參差不齊,如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要,具體有以下幾點(diǎn)可供參考。



01

試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測(cè)樣本的種類



除試劑盒特別說明外,一般不同種屬不能通用。常見待測(cè)樣本種類有:血清和血漿(不同抗凝劑),細(xì)胞上清,和細(xì)胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用。



02

試劑盒的檢測(cè)范圍



也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍,特別要注意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),對(duì)于濃度很高的樣本,可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測(cè)定樣本。



03

特異性



ELISA試劑盒的特異性與試劑盒的關(guān)鍵組分--抗體對(duì)有關(guān)。若抗體對(duì)中之一為多抗,另一個(gè)必須為單抗,如有條件最好是使用雙單抗。



04

靈敏度



靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的能力,用戶可根據(jù)自己樣本中待檢指標(biāo)的含量/濃度選擇合適的試劑盒,如果待檢指標(biāo)含量很低,一般的試劑盒不能滿足要求,建議選擇高敏的ELISA試劑盒。



05

重復(fù)性



科學(xué)實(shí)驗(yàn)講求重復(fù)性,ELISA試劑盒,其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)該控制在15%以內(nèi)。



06

簡(jiǎn)便性



試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下,實(shí)驗(yàn)時(shí)間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎。



07

美譽(yù)度



一個(gè)品牌不光要有度,更重要的是美譽(yù)度。通過行業(yè)調(diào)查公司以及網(wǎng)絡(luò),相關(guān)宣傳資料等可以找到美譽(yù)度高的ELISA試劑盒供應(yīng)商,這個(gè)反映的不僅是產(chǎn)品質(zhì)量的問題,對(duì)供應(yīng)商的售前售后服務(wù)也是一個(gè)非常嚴(yán)格的檢驗(yàn)。


常見的高美譽(yù)度品牌進(jìn)口的有R&D、Raybiotech、Merck-Millipore、Sigma-Aldrich、Thermo等,國產(chǎn)的有義翹神州、博奧森、neobioscience等。



08

文獻(xiàn)引用



產(chǎn)品的文獻(xiàn)引用特別是高質(zhì)量的SCI文章引用是很多用戶都關(guān)心的問題,這是業(yè)界對(duì)產(chǎn)品認(rèn)可的一個(gè)非常重要指標(biāo),而且對(duì)相關(guān)用戶的科研有一定的借鑒作用。


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ELISA盒子使用技巧



樣本的準(zhǔn)備:盡量使用新鮮樣本,不使用有溶血,被細(xì)菌污染、標(biāo)本保存時(shí)間過長和標(biāo)本凝固不全的樣本。ELISA檢測(cè)宜采集新鮮標(biāo)本,如不能立即測(cè)定,5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存,對(duì)于1周后檢測(cè)的樣本應(yīng)低溫凍存;做好分裝,長時(shí)間凍存的樣本避免反復(fù)凍融。


仔細(xì)閱讀說明書:所有操作嚴(yán)格按照說明書。


不同批次的試劑不要混用,檢查各組分的有效期。


預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需溫度,預(yù)防后續(xù)實(shí)驗(yàn)中由于孵育溫度或是時(shí)間不夠充分,而將一些弱陽性樣本不能檢出。


待測(cè)樣本加樣:待檢樣本過多時(shí),建議分批操作;需要稀釋的樣本提前做好稀釋,注意選對(duì)合適稀釋液;控制好加樣時(shí)間,避免加樣費(fèi)時(shí)過長造成誤差;注意加樣角度,垂直加入孔底,不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個(gè)移液頭,防止交叉污染。


溫育和洗板:溫育時(shí)間和溫度一般根據(jù)試劑盒的說明書進(jìn)行選擇。①手工洗板時(shí),拍板時(shí)要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢。


顯色:市售ELISA試劑盒中,一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液,反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15~30 min。顯色反應(yīng)需要避光。


讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析:終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成,讀取OD值時(shí)酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15~30 min再進(jìn)行。標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)(R2)一般需要大于0.99。


在科研領(lǐng)域,Raybiotech累計(jì)支持客戶發(fā)表影響因子3分以上的SCI文章超過10000余篇,影響因子超過47001分,影響因子>5的文章超過4167篇,影響因子>10的文章超過395篇,影響因子>20的文章超過58篇。


Raybiotech作為的蛋白芯片和免疫產(chǎn)品專業(yè)供應(yīng)商,擁有種類繁多的抗體芯片及ELISA及產(chǎn)品,其產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高,種屬多樣,包括涵蓋人、小鼠、大鼠、豬、馬、牛、猴、犬、貓、兔等多個(gè)種屬。


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